{"id":28535,"date":"2026-10-29T17:20:06","date_gmt":"2026-10-29T16:20:06","guid":{"rendered":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/portfolio\/eleonora-nardini\/"},"modified":"2026-10-31T11:42:28","modified_gmt":"2026-10-31T10:42:28","slug":"eleonora-nardini","status":"publish","type":"us_portfolio","link":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/portfolio\/eleonora-nardini\/","title":{"rendered":"Eleonora Nardini"},"content":{"rendered":"","protected":true},"featured_media":28536,"template":"","meta":{"_acf_changed":false},"university_us_portfolio":[28],"class_list":["post-28535","us_portfolio","type-us_portfolio","status-publish","post-password-required","hentry","university_us_portfolio-vrije-universiteit-amsterdam"],"acf":{"main_text":"","naam_van_het_proefschift":"The Janus-like role of sialic acids in the regulation of the immune system","samenvatting":"Het immuunsysteem beschermt ons tegen externe gevaren, zoals virussen en bacteri\u00ebn. Tevens houdt het intern de orde door afwijkende cellen, zoals kankercellen, te elimineren. De afgelopen decennia zien we echter een toename van situaties waarin het immuunsysteem zelf een bedreiging vormt. Dit varieert van het ontstaan van auto-immuniteit tot allergie\u00ebn, welke een steeds grotere belasting vormen voor de gezondheidszorg in de toekomst. De balans binnen het immuunsysteem wordt bewaakt door een reeks remmen en controlepunten die voorkomen dat het immuunsysteem zich richt tegen onschadelijke of lichaamseigen structuren.\n\nEen van deze remmen, die steeds meer aandacht krijgt, wordt gevormd door de siaalzuur\/Siglec axis. Siaalzuur is een monosacharide dat aan het einde van glycaanstructuren aanwezig is waardoor het een makkelijk herkennings signaal is voor immuuncellen. Siaalzuur fungeert daardoor als een self-associated molecular pattern, waarmee het een signaal van \u201czelf\u201d aan het immuunsysteem afgeeft. Cellen van het immuunsysteem, zijn uitgerust met receptoren die siaalzuren herkennen en worden Siglecs genoemd. Deze herkenning van gesialyleerde structuren door Siglecs onderdrukken een immuunrespons. Kankercellen maken gebruik van deze as om aan immuunsurveillance te ontsnappen, onder andere door de sialyleringsroute te versterken en de hoeveelheid gesialyleerde glycaanstructuren op hun oppervlak te verhogen waardoor immuun cellen geremd worden in hun functie.\n\nHet onderzoek dat in dit proefschrift wordt beschreven, werd geleid door het idee dat de natuurlijke immunosuppressieve eigenschappen van de siaalzuur\/Siglec axis kunnen worden benut om de immuunrespons tegen FVIII bij hemofilie A en tegen Der p 2 bij huisstofmijtallergie te herprogrammeren richting tolerantie. FVIII is een stollingsfactor die wordt gebruikt als substitutietherapie bij pati\u00ebnten met hemofilie A. Deze pati\u00ebnten hebben een genetische mutatie in het FVIII-gen, waardoor de bloedstollingscascade wordt verstoord. Bij tot 30% van de pati\u00ebnten met ernstige hemofilie A ontwikkelen zich neutraliserende anti-FVIII-antistoffen, waardoor de therapie ineffectief wordt. Der p 2 daarentegen is een eiwit dat wordt geproduceerd door de huisstofmijt. Hoewel dit molecuul voor de meeste mensen onschadelijk is, ontwikkelen sommige individuen er een IgE-gemedieerde immuunrespons tegen, die kan leiden tot verergering van astma, niezen, hoesten en jeuk. Onze hypothese was dat we, door FVIII en Der p 2 te koppelen aan een gesialyleerd glycan, Siglec-9 op dendritische cellen konden activeren en zo een tolerogeen programma konden initi\u00ebren.\n\nEerst onderzochten we in Hoofdstuk 2 hoe we dit systeem konden bestuderen door een reportercellijn voor een van de Siglecs te ontwikkelen. Door een Jurkat-cellijn te modificeren met een NFAT-Luc-plasmide en een Siglec-7-ITAM-chimeer, lieten we met behulp van ELISA en luminescentie zien dat een van de bekendste liganden van Siglec-7, gesialyleerd CD43, mogelijk niet in staat is om signalering te induceren. We stellen voor om deze reportercellijn te gebruiken om de screening van potenti\u00eble Siglec-7-targets te verbeteren en daarmee mogelijk de ontdekking van nieuwe aangrijpingspunten voor de behandeling van kanker te versnellen.\n\nVervolgens onderzochten we hoe we dit systeem konden vertalen naar een farmaceutische formulering van FVIII. In Hoofdstuk 3 beschreven we een strategie om immunodominante peptiden uit FVIII te selecteren en deze chemisch te conjugeren aan een tetrasacharide dat eindigt in siaalzuur. We onderzochten de binding aan Siglecs met behulp van ELISA en toonden vervolgens aan dat de door gesialyleerde FVIII-peptiden ge\u00efnduceerde IL-10-secretie in monocyte-derived dendritic cells afhankelijk was van Siglec-9, door gebruik te maken van knock-outcellen. In Hoofdstuk 4 gingen we vervolgens verder met het testen van deze gesialyleerde FVIII-peptiden in een FVIII-KO-model. In vergelijking met de controlegroep die behandeld werd met niet-gesialyleerde peptiden, zagen we een toename van Tregs in de milt en lagere percentages IFN\u03b3- en TNF\u03b1-producerende effector-T-cellen.\n\nHoofdstuk 5 breidt het onderzoek naar siaalzuur\/Siglec-interacties uit naar de context van allergie. We conjugereerden hetzelfde gesialyleerde glycan dat in hoofdstukken 3 en 4 werd gebruikt aan Der p 2 en onderzochten vervolgens de effecten ervan op perifere mononucleaire bloedcellen, ofwel PBMCs, van niet-allergische vrijwilligers. Onze resultaten lieten zien dat gesialyleerd Der p 2 zowel de productie van Th2-cytokinen, waaronder IL-4, IL-5 en IL-13, als de activatie van CD4+ T-cellen onderdrukte. Daarnaast zagen we hogere frequenties van twee subsets van LAG-3+ regulatoire T-cellen in PBMCs die met gesialyleerd Der p 2 waren gekweekt.\n\nTot slot hebben we, zoals besproken in Hoofdstuk 6, onderzocht hoe het rechtstreeks sialyleren van antigenen en het targeten van ITIM-dragende Siglecs op myelo\u00efde cellen het immuunsysteem richting tolerantie kan sturen in twee verschillende klinische contexten: hemofilie A en huisstofmijtallergie. Daarnaast hebben we laten zien dat zowel de toedieningsroute als de immuunomgeving in belangrijke mate bepalen of siaalzuren immunosuppressie of juist activatie bevorderen. Daarmee hebben we de Janus-achtige rol van siaalzuur in de regulatie van het immuunsysteem blootgelegd.","summary":"The immune system is a powerful machinery designed to protect us from external dangers such as virus and bacteria and to keep the order internally by eliminating rogue cells such as cancer. Unfortunately, during the past few decades, cases are on the rise where the immune system itself represents a threat. These range from autoimmunity to allergy, which arise when the balance between immune activation and tolerance is lost. Equilibrium in the immune system is kept by a series of breaks and checkpoints.\n\nOne of these breaks, which is gaining more and more attention, is represented by the sialic acid\/Siglec axis. Sialic acid is a monosaccharide which caps mammalian glycans. Given its position as outermost glycan, it is used as self-associated molecular pattern, to signal \u201cself\u201d to the immune system. Accordingly, cells of the immune system, specifically belonging to the myeloid compartment, are equipped with receptors called Siglecs to sense sialylated moieties and suppress the response. Cancer cells exploit this axis to evade immune surveillance, by increasing the sialylation pathway and the concentration of sialylated glycans on their surface to be seen as \u201cself\u201d.\n\nThe research conducted in this thesis was guided by the idea that the natural immunosuppressive properties of the sialic acid \/ Siglec axis could be harnessed to reprogram the immune response to FVIII in hemophilia A and Der p 2 in house dust mite allergy towards tolerance. As reviewed in Chapter 1, FVIII is a coagulation factor that is used in replacement therapies for hemophilia A patients, whom presents with a genetic mutation in the FVIII locus which hampers the coagulation cascade. In up to 30% severe cases the patients develop anti-FVIII neutralizing antibodies which makes the therapy ineffective. On the other hand, Der p 2 is a protein produced by house dust mite. It is an unharmful molecule for humans, but some individuals develop an immune response towards it guided by IgEs which culminates in exacerbation of asthma, sneezing, coughing and itch. We hypothesized that by coupling FVIII and Der p 2 to a sialylated glycan we could engage Siglec-9 on dendritic cells and thus initiate a tolerogenic program.\n\nFirst, in Chapter 2 we investigated how to study this system by developing a reporter cell line for one of the Sigecs. By engineering a Jurkat cell line with a NFAT-Luc plasmid and Siglec-7-ITAM chimera, we revealed by ELISA and luminescence that one of the most renowned Siglec-7 ligand, sialylated CD43, might not be capable of inducing signalling. We propose to use this reporter to improve the screening of targets of Siglec-7, to potentially accelerate the discovery of novel points of intervention in the treatment of cancer.\n\nNext, we investigated how to translate this system into a pharmaceutical formulation of FVIII. In Chapter 3, we outlined a strategy to select immunodominant peptides from FVIII and chemically conjugate them to a sialic acid-terminating tetrasaccharide. We tested Siglecs binding by ELISA and further demonstrated that IL-10 secretion induced by sialylated FVIII peptides in monocyte-derived dendritic cells was Siglec-9 dependent by making use of knock-outs. In Chapter 4 we moved onto testing these sialylated FVIIII peptides in a FVIII-KO model, showing that compared with the control group treated with not-sialylated peptides there was an increase in Tregs in the spleens and lower percentages of IFN\u03b3- and TNF\u03b1-secreting Teff.\n\nChapter 5 extends the investigation of sialic acid\/Siglec interactions to the context of allergy. We conjugated the same sialylated glycan employed in chapters 3 and 4 to Der p 2, and analyzed its effects on peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from non-allergic volunteers. Our data showed that sialylated Der p 2 both suppressed the production of Th2 cells cytokines (IL-4, IL-5, IL-13), and the activation of CD4+ T cells. Moreover, higher frequencies of two subsets of lymphocyte activation gene 3 (LAG-3+) regulatory T cells were observed in PBMCs cultured with sialylated Der p 2.\n\nIn conclusion, as discussed in Chapter 6, within this thesis we investigated how directly sialylating antigens and targeting ITIM-carrying Siglecs on myeloid cells can bias the immune system towards tolerance in two different clinical contexts, inhibitors in HA and house dust mite allergy. We also highlighted how the route of delivery and the immune niche critically determine whether sialic acids drive suppression or activation, uncovering what I called the Janus-like role of sialic acid in immune regulation.","auteur":"Eleonora Nardini","auteur_slug":"eleonora-nardini","publicatiedatum":"2 december 2026","taal":"EN","url_flipbook":"https:\/\/ebook.proefschriftmaken.nl\/ebook\/eleonoranardiniproof?iframe=true","url_download_pdf":"https:\/\/ebook.proefschriftmaken.nl\/download\/c5396887-5fea-4360-b3dd-0ddc09b744f8\/highres","url_epub":"","ordernummer":"19756","isbn":"978-94-6534-807-0","doi_nummer":"","naam_universiteit":"Vrije Universiteit Amsterdam","afbeeldingen":28536,"video_url":"","podcast_url":"","naam_student:":"","binnenwerk":"","universiteit":"Vrije Universiteit Amsterdam","cover":"","afwerking":"","cover_afwerking":"","design":""},"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/us_portfolio\/28535","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/us_portfolio"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/types\/us_portfolio"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/media\/28536"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=28535"}],"wp:term":[{"taxonomy":"university_us_portfolio","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/university_us_portfolio?post=28535"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}