{"id":14622,"date":"2026-04-30T14:36:03","date_gmt":"2026-04-30T14:36:03","guid":{"rendered":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/portfolio\/jing-wang\/"},"modified":"2026-04-30T14:36:21","modified_gmt":"2026-04-30T14:36:21","slug":"jing-wang","status":"publish","type":"us_portfolio","link":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/portfolio\/jing-wang\/","title":{"rendered":"Jing Wang"},"content":{"rendered":"","protected":true},"excerpt":{"rendered":"","protected":true},"author":7,"featured_media":14623,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"us_portfolio_category":[45],"class_list":["post-14622","us_portfolio","type-us_portfolio","status-publish","post-password-required","hentry","us_portfolio_category-new-template"],"acf":{"naam_van_het_proefschift":"Rethinking Huanglongbing Research","samenvatting":"Huanglongbing (HLB), of de citrusvergroeningsziekte, is een van de meest verwoestende bedreigingen voor de wereldwijde citrusproductie. Het wordt veroorzaakt door de aan het flo\u00ebem gebonden bacterie Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas), die wordt overgebracht door de Aziatische citrusbladvlo (Diaphorina citri). De ziekte leidt tot flo\u00ebemblokkade, bladchlorose, vruchtvervorming en uiteindelijk de dood van de boom. Ondanks decennia aan onderzoek is de vooruitgang in het begrijpen van de moleculaire basis van de interacties tussen CLas en de gastheer beperkt gebleven door drie belangrijke belemmeringen: het onvermogen om CLas te kweken, het gebrek aan gesynchroniseerde infectiesystemen voor studies in vroege stadia, en de afwezigheid van hanteerbare in planta-modellen voor het valideren van genfuncties of medicijnen. In dit proefschrift heb ik geprobeerd deze uitdagingen aan te pakken door nieuwe experimentele methoden te ontwikkelen en nieuwe mechanistische perspectieven voor te stellen die samen ons begrip van de biologie van CLas en de pathogenese van HLB vergroten.\n\nIn hoofdstuk 1 introduceer ik de historische achtergrond, epidemiologie en biologische kenmerken van Candidatus Liberibacter asiaticus en HLB, waarbij ik samenvat waarom de vooruitgang op dit gebied traag is verlopen. Ik schets de drie belangrijkste knelpunten in het HLB-onderzoek \u2014 het gebrek aan een kweekbare bacterie, de afwezigheid van gesynchroniseerde infectiesystemen in vroege stadia en de uitdagingen van het bestuderen van flo\u00ebemspecifieke reacties in hele bladmonsters \u2014 evenals de beperkingen van de huidige bestrijdingsstrategie\u00ebn. Dit hoofdstuk stelt de conceptuele en technische hiaten vast die de ontwikkeling van nieuwe methodologie\u00ebn in het hele proefschrift motiveren.\n\nIn hoofdstuk 2 hebben we een aangepast micro-entingsysteem (MiG) ontwikkeld dat een snelle en gesynchroniseerde infectie van citruszaailingen mogelijk maakt met behulp van knoppen van HLB-symptomatische enten. Dit systeem bereikte een systemische CLas-invasie binnen 40 dagen \u2014 aanzienlijk sneller dan conventionele enting of door bladvlooien gemedieerde inoculatie. Met behulp van lasermicrodissectie (LCM) van flo\u00ebemweefsels gevolgd door RNA-sequencing hebben we het eerste flo\u00ebemspecifieke vroegstadium-transcriptoom gegenereerd van citrus die op CLas reageert. Via deze aanpak identificeerden we 75 niet eerder gerapporteerde vroeg-reagerende genen. Deze genen bieden niet alleen inzicht in vroege reacties van de gastheer, maar vertegenwoordigen ook veelbelovende infectie-induceerbare promotoren voor gerichte antimicrobi\u00eble toepassingen.\n\nIn hoofdstuk 3 heb ik 79 paren homologe genen geanalyseerd die worden gedeeld tussen CLas en het symbiotische megaplasmide pSymA van Sinorhizobium meliloti (Sme) om te onderzoeken hoe CLas zijn genregulatie heeft ontwikkeld in vergelijking met zijn vrijlevende verwanten. Door dubbele promotor-reporterfusies te construeren en deze tot expressie te brengen in het Sme-Medicago-knolletjessysteem, heb ik de promotoractiviteiten in planta gevisualiseerd. Ik ontdekte dat geen van de homologe paren een identiek expressiepatroon vertoonde. CLas-promotoren waren vaak actief in infectiedraden en symbiosomen, terwijl hun pSymA-tegenhangers zwak of inactief waren. Deze resultaten geven aan dat de regulatoire netwerken van CLas diepgaand zijn afgeweken van die van rhizobia, wat waarschijnlijk een aanpassing weerspiegelt aan een stabiele intracellulaire flo\u00ebemniche.\n\nIn hoofdstuk 4 heb ik de Sme-Medicago wortelknolletjessymbiose gebruikt als heteroloog model om de CLas-transcriptiefactor RpoH te bestuderen, een belangrijke regulator van stressreacties, om functionele testen van CLas-genen in planta mogelijk te maken. Deletie van RpoH in Sme veroorzaakte ernstige defecten in de ontwikkeling van de knolletjes. Complementatie met CLas RpoH herstelde de knolletjesvorming gedeeltelijk, wat functionele conservering tussen de twee soorten aantoont. Belangrijk is dat de eerder ge\u00efdentificeerde remmer rosiglitazonmaleaat dit complementatie-effect omkeerde en ook de CLas-titers in ge\u00efnfecteerde citruszaailingen onderdrukte. Ik heb zo een hanteerbaar in planta screeningsplatform opgezet voor CLas functionele assays en de evaluatie van medicijnen, wat een waardevolle brug vormt tussen moleculaire studies en toegepaste ziektebestrijding.\n\nIn hoofdstuk 5 heb ik grootschalige fylogenomische analyses uitgevoerd van meer dan 1.600 \u03b1-proteobacteri\u00eble genomen met behulp van de meest geconserveerde AMPHORA-huishoudgenen. Mijn resultaten lieten zien dat Liberibacter-soorten genest zijn binnen het geslacht Rhizobium, in plaats van een aparte lijn te vormen. Dit staat in contrast met eerdere studies, die sneller evoluerende gensets gebruikten en waarschijnlijk werden be\u00efnvloed door long-branch attraction. De verfijnde fylogenetische plaatsing impliceert dat Liberibacter een gespecialiseerde, in genoom gereduceerde Rhizobium-lijn vertegenwoordigt die zich onafhankelijk heeft aangepast aan het intracellulaire leven in flo\u00ebem- en bladvlo-gastheren. Dit evolutionaire inzicht verduidelijkt niet alleen de taxonomische positie van CLas, maar ondersteunt ook het gebruik van op Rhizobium gebaseerde systemen als surrogaten voor de studie ervan.\n\nSamen bieden deze studies een kader dat moleculaire mechanismen, experimentele modellen en de evolutionaire context met elkaar verbindt. Door een snel en gesynchroniseerd infectiesysteem op te zetten, in planta-surrogaatmodellen te ontwikkelen en de evolutionaire wortels van CLas opnieuw te defini\u00ebren, heb ik zowel praktische instrumenten als conceptuele vooruitgang bijgedragen aan de studie van HLB. De MiG-LCM-aanpak maakt de ontdekking van vroege verdedigingsmarkers en induceerbare promotoren mogelijk; de op rhizobium gebaseerde systemen maken functionele gentesten en remmerscreening mogelijk; en de fylogenetische reconstructie plaatst CLas binnen het geslacht Rhizobium.\n\nGezamenlijk opent dit werk nieuwe richtingen voor functionele genomica, moleculaire pathologie en gerichte manipulatie van HLB-resistentie in citrus, wat de weg vrijmaakt voor een duurzaam beheer van HLB en andere flo\u00ebem-beperkte bacteri\u00eble ziekten.","summary":"Huanglongbing (HLB), or citrus greening disease, is one of the most devastating threats to global citrus production. It is caused by the phloem-limited bacterium Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas), transmitted by the Asian citrus psyllid (Diaphorina citri). The disease leads to phloem blockage, leaf chlorosis, fruit deformation, and eventually tree death. Despite decades of research, progress in understanding the molecular basis of CLas\u2013host interactions has been limited by three major constraints: the unculturable nature of CLas, the lack of synchronized infection systems for early-stage studies, and the absence of tractable in planta models for gene function or drug validation. In this thesis, I aimed to address these challenges by developing new experimental methods and proposing new mechanistic perspectives that together advance our understanding of CLas biology and HLB pathogenesis.\n\nIn Chapter 1, I introduce the historical background, epidemiology, and biological characteristics of Candidatus Liberibacter asiaticus and HLB, summarizing why progress in this field has been slow. I outline the three major bottlenecks in HLB research\u2014the lack of a culturable bacterium, the absence of synchronized early-stage infection systems, and the challenges of studying phloem-specific responses in whole-leaf samples\u2014as well as the limitations of current control strategies. This chapter establishes the conceptual and technical gaps that motivate the development of new methodologies throughout the thesis.\n\nIn Chapter 2, we developed a modified micrografting (MiG) system that allows rapid and synchronized infection of citrus seedlings using buds from HLB-symptomatic scions. This system achieved systemic CLas invasion within 40 days\u2014significantly faster than conventional grafting or psyllid-mediated inoculation. Using laser-capture microdissection (LCM) of phloem tissues followed by RNA sequencing,we generated the first phloem-specific early-stage transcriptome of citrus responding to CLas. Through this approach, we identified 75 previously unreported early-responsive genes. These genes not only provide insight into early host responses but also represent promising infection-inducible promoters for targeted antimicrobial applications.\n\nIn Chapter 3, I analyzed 79 pairs of homologous genes shared between CLas and the symbiotic megaplasmid pSymA of Sinorhizobium meliloti (Sme)to explore how CLas has evolved its gene regulation compared to its free-living relatives. By constructing dual-promoter reporter fusions and expressing them in the Sme\u2013Medicago nodule system, I visualized promoter activities in planta. I found that none of the homologous pairs displayed an identical expression pattern. CLas promoters were often active in infection threads and symbiosomes, while their pSymA counterparts were weak or inactive. These results indicate that the regulatory networks of CLas have diverged profoundly from those of rhizobia, likely reflecting adaptation to a stable intracellular phloem niche.\n\nIn Chapter 4, I used the Sme\u2013Medicago root nodule symbiosis as a heterologous model to study the CLas transcription factor RpoH, a key regulator of stress responses, to enable in planta functional testing of CLas genes. Deletion of RpoH in Sme caused severe defects in nodule development. Complementation with CLas RpoH partially restored nodule formation, demonstrating functional conservation between the two species. Importantly, the previously identified inhibitor rosiglitazone maleate reversed this complementation effect and also suppressed CLas titers in infected citrus seedlings. I thus established a tractable in planta screening platform for CLas functional assays and drug evaluation, providing a valuable bridge between molecular studies and applied disease control.\n\nIn Chapter 5, I performed large-scale phylogenomic analyses of over 1,600 \u03b1-proteobacterial genomes using the most conserved AMPHORA housekeeping genes. My results showed that Liberibacter species are nested within the genus Rhizobium, rather than forming a separate lineage. This contrasts with earlier studies, which used faster-evolving gene sets and were likely affected by long-branch attraction. The refined phylogenetic placement implies that Liberibacter represents a specialized, genome-reduced Rhizobium lineage that independently adapted to intracellular life in phloem and psyllid hosts. This evolutionary insight not only clarifies the taxonomic position of CLas, but also supports the use of Rhizobium-based systems as surrogates for its study.\n\nTogether, these studies provide a framework linking molecular mechanisms, experimental models, and evolutionary context. By establishing a rapid and synchronized infection system, developing in planta surrogate models, and redefining the evolutionary roots of CLas, I have contributed both practical tools and conceptual advances to the study of HLB. The MiG\u2013LCM approach enables discovery of early defense markers and inducible promoters; the rhizobium-based systems allow gene functional testing and inhibitor screening; and the phylogenetic reconstruction places CLas within the Rhizobium genus.\n\nCollectively, this work opens new directions for functional genomics, molecular pathology, and targeted engineering of HLB resistance in citrus, paving the way toward sustainable management of HLB and other phloem-limited bacterial diseases.","auteur":"Jing Wang","auteur_slug":"jing-wang","publicatiedatum":"13 mei 2026","taal":"EN","url_flipbook":"https:\/\/ebook.proefschriftmaken.nl\/ebook\/jingwang?iframe=true","url_download_pdf":"https:\/\/ebook.proefschriftmaken.nl\/download\/ae5cbd74-c66d-41cd-9844-f425f90b2902\/optimized","url_epub":"","ordernummer":"18729","isbn":"","doi_nummer":"","naam_universiteit":"Wageningen University","afbeeldingen":14624,"naam_student:":"","binnenwerk":"","universiteit":"Wageningen University","cover":"","afwerking":"","cover_afwerking":"","design":""},"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/us_portfolio\/14622","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/us_portfolio"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/types\/us_portfolio"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/users\/7"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=14622"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/us_portfolio\/14622\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":14625,"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/us_portfolio\/14622\/revisions\/14625"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/media\/14623"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=14622"}],"wp:term":[{"taxonomy":"us_portfolio_category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.proefschriftmaken.nl\/en\/wp-json\/wp\/v2\/us_portfolio_category?post=14622"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}